淋球菌的分离培养是怎么回事

淋球菌的分离培养是怎么回事

对于某些治疗不正规的患者，以及女性患 者，分泌物涂片诊断就不够了，也很难用于判断 治疗结果，这时一定要进行淋球菌的分离培养。 这种方法特异性高，但方法较为复杂，对实验室 的要求也较高，所以要到正规医院去作诊断，很 难想象在环境污浊、杂物横放的无照行医者那里 能作出正确的培养结果来。

淋球菌的分离培养方法怎样操作

由男性病人尿道取材时，一般用接种环或小 棉拭子伸入尿道2~4mm,转动后取出分祕物， 有时略带少许黏膜，故患者感觉疼痛，但较轻 微，为一过性疼痛；从女病人取材时，需先用阴 道窥器暴露宫颈口，用棉拭子揩去宫颈口的脓性 分泌物后，再用第二个棉拭子插入宫颈管1cm，转动并停留10~20秒钟，让棉拭子充分吸附分 泌物，患者也有轻微的不适感。将采集的标本立即接种于培养基中。国外常 用的培养基有Thayer - Martin培养基、New York City培养基和Martin - Lewis培养基。国 内研制国产化的培养基，具体培养方法为使用 5%~10%二氧化碳环境（烛缸），培养温度为 36℃，相对湿度80%以上，培养24~48小时观 看结果。

淋病是如何引起的

传染途径：

1、通过性接触传染

成人特别是男性淋病99%-100%属于性交传染。传播速度快，而且感染率很高，感染后3-5天即可发病。感染人群中以青壮年为主。

目前，我国以暗娼为主要传染源。调查资料表明，在淋病患者中男女一次性交感染率为22%-35%;男女双方感染率是男性易于传染给女性。

2、非性接触传染

此种情况较少，主要是接触病人含淋病双球菌的分泌物或被污染的用具，如沾有分泌物的毛巾、脚布脚盆、衣被，甚至于厕所的马桶圈等均可传染。特别是女性(包括幼女)，因其尿道和生殖道短，很易感染。

病原体：

1.发现 1879年，奈瑟从35例急性尿道炎、阴道炎及新生儿急性结膜炎病人的分泌物中，分离出淋病双球菌。1885年，Bumm在人、牛或羊的凝固血清培养基上培养淋球菌获得成功，将菌种接种于健康人的尿道内也可产生同样的症状。至此，淋球菌是淋病的病原体的结论始告成立。

2.形态与染色 淋球菌呈卵圆形或豆形，菌体长0.6～0.8µm，宽约0.5µm。常成对排列，邻近面扁平或稍凹陷，像两粒豆子对在一起。无鞭毛，不形成芽孢。在急性感染的机体内，其形态较典型，多位于细胞浆内。慢性期则在细胞外。淋球菌革兰染色阴性。用碱性美蓝染色时，菌体呈蓝色。用Pappehheim Saathof染色时，菌体呈红色，背景为天蓝色，十分清晰。

淋球菌在人工培养基上有五种不同的菌落形态，分别称为T1，T2，T3，T4，T5，其中T1和T2有毒力，T3和T4无菌毛，不能感染人类。

3.菌体结构 淋球菌的致病主要与菌体外面的结构有密切关系。淋球菌外面结构为外膜，外膜的主要成分为膜蛋白、脂多糖和菌毛。膜蛋白可使淋球菌黏附于人体黏膜上，通过细胞吞噬作用进人细胞，在细胞内大量繁殖，导致细胞崩解，淋球菌扩散到黏膜下层引起感染。菌毛易黏附于子宫腔和口腔上皮细胞表面，有致病力及传染性。

4.培养与生化特性 在含有动物蛋白质如血液、血清、蛋黄、腹水等的培养基上生长良好。培养的适宜温度为35～36℃，适宜pH为7.5，需要在5%二氧化碳的环境中培养。

在人体尿道中可使葡萄糖发酵，但不能使果糖发酵，因此，可利用这一特性作葡萄糖发酵试验，以与脑膜炎双球菌鉴别。淋球菌不产生靛基质及硫化氢，在生长过程中可产生氧化酶，这在早期鉴定有一定意义。

5.营养分型 根据淋球菌培养时所需要的氨基酸和核酸营养基础，可将淋球菌分为35个营养型，其中Arg、Hyx、Ura型淋球菌可引起无症状淋病及播散性淋病，对血清具有抗力，但对青霉素及其他一些药物则敏感。

6.抵抗力 淋球菌较为娇嫩，最怕干燥，适宜在潮湿、温度为35～36℃、含2.5%～5.0%二氧化碳的条件下生长，其生长的最适pH为7.0～7.5。淋球菌对外界理化因素的抵抗力相当差，在完全干燥的环境中1～2h即死亡，但若附着于衣裤和被褥中，则能生存18～24h，在厚层脓液或湿润的物体上可存活数天。在50℃仅能存活5min。淋球菌对常用的黏膜杀菌剂抵抗力很弱。它对可溶性银盐尤其敏感，1∶4000硝酸银溶液可使其在7min内死亡，使脓液中的淋球菌2min内死亡。1%苯酚(石炭酸)溶液能在3min内将其杀灭。除耐药菌株外，淋球菌对抗生素敏感，但抗生素的最小抑菌浓度逐渐有所提高。

淋病需要做哪些化验检查

淋球菌实验室检查包括涂片、培养检查淋球菌、抗原检测、药敏试验及产青霉素酶淋球菌(PPNG)测定、基因诊断。

一、涂片检查

取患者尿道分泌物或宫颈分泌物，作革兰氏染色，可在多形核白细胞内找到革兰氏阴性双球菌。涂片对有大量脓性分泌物的单纯淋菌性前尿道炎患者，此法阳性率在90%左右，可以初步诊断。

二、培养检查

淋球菌培养是诊断的重要佐证，培养法对症状很轻或无症状的男性、女性患者都是较敏感的方法，只要培养阳性就可确诊，在基因诊断问世以前，培养是世界卫生组织推荐的筛选淋病的唯一方法。

三、抗原检测

1、固相酶免疫试验(EIA)：可用来检测临床标本中的淋球菌抗原，在流行率很高的地区而又不能作培养，或标本需长时间远送时使用，可以在妇女人群中用来诊断淋球菌感染。

2、直接免疫荧光试验：通过检测淋球菌外膜蛋白I的单克隆抗体作直接免疫荧光试验。但目前在男女二性标本的敏感不高，特异性差，加之实验人员的判断水平，故该实验尚不能推荐用来诊断淋球菌感染。

四、基因诊断

1、淋球菌的基因探针诊断。此诊断所用的探针有：质粒DNA探针、染色体基因探针和RNA基因探针。

2、淋球菌的基因扩增检测。聚合酶链反应(PCR)技术和连接酶链反应的出现进一步提高了检测淋球菌的灵敏性，它具有快速、灵敏、特异、简便的优点，可以直接检测临床标本中极微量的病原体。

淋病复查检查项目 培养检查

淋球菌培养是淋病诊断的重要依据，也是复查诊断的必要手段。培养法为无症状患者或者表面治愈的淋病患者复查提供很好判断作用。

女性淋病的化验方法

淋病检测方法种类很多，淋病患者或者疑似淋病患者的朋友们可以任选其中任一方法进行检测，对于病患到医院看病很多医生都会采取取样检测的方式进行检测，淋病也有这样一种检测方法，但是世界卫生组织比较提倡培养检测的方式，因为这种方式检测更加精准无误。我们来了解一下淋病的检测方法。

1)涂片检查：取患者尿道分泌物，作革兰氏染色，在多形核白细胞内找到革兰氏阴性双球菌。涂片对有大量脓性分泌物的单纯淋病患者，阳性率在90%左右;对分泌物较少的慢性淋病患者，阳性率低，因此要取前列腺按摩液，以提高检出率。

2)培养检查：淋球菌培养是诊断的重要佐证，培养法对症状很轻或无症状的男性、女性病人都是较敏感的方法，只要培养阳性就可确诊。在基因诊断问世以前，培养是世界卫生组织推荐的筛选淋病的唯一方法。

3)抗原检测：包括两种，一是固相酶免疫试验，可用来检测临床标本中的淋球菌抗原;二是直接免疫荧光试验：通过检测淋球菌外膜蛋白I的单克隆抗体作直接免疫荧光试验。前者可在妇女人群中用来诊断淋球菌感染，后者实验尚不能推荐。

4)药敏试验：在培养阳性后进一步作药敏试验。用纸片扩散法做敏感试验，或用琼脂平皿稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)，用以指导选用抗生素

淋病的发生如何进行检查

一、涂片检查

取患者尿道分泌物或宫颈分泌物，作革兰氏染色，在多形核白细胞内找到革兰氏阴性：双球菌。涂片对有大量脓性分泌物的单纯淋菌性前尿道炎患者，此法阳性率在90%左右，可以初步诊断。女性宫颈分泌物中杂菌多，敏感性和特异性较差，阳性率仅为50-60%，且有假阳性，因此世界卫生组织推荐用培养法检查女病人。慢性淋病由于分泌物中淋球菌较少，阳性率低，因此要取前列腺按摩液，以提高检出率。咽部涂片发现革兰氏阴性双球菌不能诊断淋病，因为其他奈瑟菌属在咽部是正常的菌群。另外对症状不典型的涂片阳性应作进一步检查。

二、培养检查

淋球菌培养是诊断的重要佐证，培养法对症状很轻或无症状的男性、女性病人都是较敏感的方法，只要培养阳性就可确诊，在基因诊断问世以前，培养是世界卫生组织推荐的筛选淋病的唯一方法。目前国外推荐选择培养基有改良的Thayer-Martin(TM)培养基和New York City(NYC)培养基。国内采用巧克力琼脂或血琼脂培养基，均含有抗生素，可选择地抑制许多其他细菌生长。在36℃，70%湿度，含5%- 10%CO2(烛缸)环境中培养，24-48小时观察结果。培养后还需进行菌落形态，革兰氏染色，氧化酶试验和糖发酵试验等鉴定。培养阳性率男性80%- 95%，女性80-90%。

三、抗原检测

1.固相酶免疫试验(EIA)：可用来检测临床标本中的淋球菌抗原，在流行率很高的地区而又不能作培养或标本需长时间远送时使用，可以在妇女人群中用来诊断淋球菌感染。2.直接免疫荧光试验：通过检测淋球菌外膜蛋白I的单克隆抗体作直接免

四、基因诊断

1.淋球菌的基因探针诊断：淋球菌的基因探针诊断，所用的探针有：质粒DNA探针，染色体基因探针和rRNA基因探针。2、淋球菌的基因扩增检测。

淋病如何确诊

诊断淋病有哪些检查呢?涂片检查：在男性患者尿道取材特异性较高，具有初步诊断价值：但在女性病人中，由于道中的菌从复杂，涂片中可以见到与淋菌相似而又是的双球菌，易致误诊。因此，世界卫生组织不推荐在诊断性淋病时应用涂片而主张直接用培养的方法。②淋菌培养：淋菌分离培养时取材方法一定要下确。由于淋球菌主要在柱状上皮不是在复层鳞状上皮细胞中增殖，所以从尿道或宫颈取材时深度一定要够。

从宫颈部位取材时，用第一个棉试揩去宫口的脓性分汤物，再用第二个棉试轻轻捅入宫颈管lcm以上，转动并放置10到30秒，让棉试充分吸附分泌物，取材料中最好带有少量脱落的粘膜细胞。如果只在阴道口取少量分泌物作培养，分离的阳性率很低，因活菌随分泌物从了宫颈口流，通过阴道时受各种杂菌的作用，加PH 值低，到阴道时细菌的生命力已很低，甚至死亡。同时要注意淋菌对各种理化I夭l了的抵抗力很弱，取材过程中所用的器材不能粘有消毒药液。淋菌培养足日前唯一用于淋病筛查和发现病人的方法。

在做实验检查前腰询问性病接触史及发病经过，以免漏诊。然后观察淋病感染的早期体征主要局限于下生殖道、泌尿道。妇科检金时注意尿道、尿道旁腺、道庭火腺有无炎症表现，宫颈口有无脓性排液。

怀疑患上性病后应该做哪些检查

(一)涂片检查：取患者尿道分泌物或宫颈分泌物，作革兰氏染色，在多形核白细胞内找到革兰氏阴性。

(二)培养检查：淋球菌培养是诊断的重要佐证，培养法对症状很轻或无症状的男性、女性病人都是较敏感的方法，只要培养阳性就可确诊，在基因诊断问世以前，培养是世界卫生组织推荐的筛选淋病的唯一方法。

(三)抗原检测

1.固相酶免疫试验(EIA)：可用来检测临床标本中的淋球菌抗原，在流行率很高的地区而又不能作培养或标本需长时间远送时使用，可以在妇女人群中用来诊断淋球菌感染。

2.直接免疫荧光试验：通过检测淋球菌外膜蛋白I的单克隆抗体作直接免疫荧光试验。但目前在男女二性标本的敏感不高，特异性差，加之实验人员的判断水平，故该实验尚不能推荐用来诊断淋球菌感染。

(四)基因诊断淋球菌的基因探针诊断：淋球菌的基因探针诊断，所用的探针有：质粒DNA探针，染色体基因探针和rRNA基因探针。

(五)药敏试验：在培养阳性后进一步作药敏试验。用纸片扩散法做敏感试验，或用琼脂平皿稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)，用以指导选用抗生素。

男性淋球菌怎么检查诊断

1.分泌物的涂片检查

主要适用于男性。

(1)用灭菌生理盐水洗净尿道口。

(2)戴消毒手套后，用手指由阴茎根部向尿道口方向挤出脓液，用接种环或棉拭子蘸取脓液，轻轻涂于载玻片上，待其自然干燥后加热固定，做革兰染色，然后镜检。

(3)在多形核白细胞内找到革兰阴性的肾形双球菌时，可明确诊断。

2.淋球菌的分离培养

(1)取材：男性患者从尿道取材时，可用细小棉拭子伸入尿道2～4cm，轻轻转动后取出分泌物(应略带黏膜)。

(2)标本取出后立即接种于培养基中，目前常用加入多黏菌素的血液琼脂或巧克力琼脂培养基。

(3)初次分离应使用5%～10%CO2烛缸，培养温度以36℃为宜，相对湿度80%以上，培养24～48h看结果。

(4)淋球菌在多黏菌素B血液琼脂上经24～48h培养后，可形成圆形、凸起、湿润、光滑、半透明或灰白色的菌落，边缘呈花瓣状，直径0.5～1.0cm，用接种环触之有黏性，如继续培养，菌落体积增大，表面粗糙，边缘皱缩。

3.淋球菌的鉴定——氧化酶试验

(1)配制氧化酶试剂：0.5%～1%盐酸二甲基对苯二胺水溶液。

(2)将溶液滴加于可疑菌落上，观察颜色变化。也可先将试剂滴在一小张滤纸片上，然后挑取可疑菌落与之接触，观察颜色变化。

(3)菌落在接触氧化酶试剂15～20s出现红色，保持30s以上，然后逐渐变成紫色，最后呈黑色，为氧化酶试验阳性，证实为淋球菌。

淋球菌感染怎么治疗好的快

1、淋球菌耐药：根据近年来我国淋球菌耐药监测的资料，我国淋球菌分离株对青霉素及四环素的染色体耐药较为普遍，许多城市和地区检出(PPNG)。质粒介导的TRNG亦呈上升趋势。青霉素和四环素目前已不作为治疗淋病的推荐药物。此外，耐喹诺酮淋球菌已在我国出现，且耐药菌株比率逐年增高，许多地区耐喹诺酮淋球菌的比率高达80%以上，在这些地区不应选用该类药治疗淋病。对喹诺酮耐药性不清楚的地区，在给患者应用环丙沙星或氧氟沙星时，需密切随防，观察疗效或及时调整治疗方案，防止治疗失败。

2、混合感染：泌尿生殖道淋球菌感染常同时合并沙眼衣原体感染(在男性约占20%，女性约占40%)。因此，推荐对成人淋病患者常规进行衣原体筛查或同时加用治疗衣原体的药物。如可选用多西环素100mg/次，2次/d，口服，连用10天，或阿奇霉素1g，顿服。

3、性伴治疗：淋病为可治愈的性病，但人体对淋球菌感染无有效的特异性免疫，易重复感染是其特点之一。性伴未进行治疗往往是导致淋病复发或再感染的重要原因。因此，对确诊为淋球菌感染的全部患者应进行性伴追踪。对有症状尿道感染男性患者近2周内接触的性伴均应进行检查和治疗，对其他部位感染或无症状患者应追踪近3个月内的性伴。

4、有合并症淋病的治疗：无合并症肛门生殖器淋球菌感染若治疗不及时或治疗不当，感染可进一步蔓延导致局部或系统性并发症。男性最常见的合并症为附睾炎，女性最常见的合并症为盆腔炎症性疾病(PID)及前庭大腺炎。对有合并症淋病的治疗除疗程要足够(10天)外，还应考虑到多种病原体的混合感染，如合并衣原体或(和)厌氧菌感染，治疗方案应包括针对这些病原体的抗生素。

5、随访：对接受正规治疗，没有再接触新性伴或未治疗的性伴，临床症状和体征全部消失而达到临床痊愈的患者，不必常规做病原学检查进行判愈。有下列情况时应做淋球菌培养检查：以前有治疗失败史;对抗生素耐药;未遵医嘱治疗;咽部或直肠淋球菌感染;接触未经治疗的性伴;怀疑非培养试验结果为假阳性;妊娠期感染;并发盆腔炎症性疾病或播散性淋球菌感染;儿童患者。病原学检查宜在停药1周后进行。

表皮葡萄球菌的微生物学诊断

不同病型采取不同检材如脓汁、血液、可疑食物、呕吐物及粪便等。

直接涂片镜检

分离培养与鉴定

将标本接种于血琼脂平板，甘露醇和高盐培养基中进行分离培养，孵育后挑选可凝菌落进行涂片、染色、镜检。致病性葡萄球菌的主要特点:凝固酶产生阳性，金黄色素，有溶血性，发酵甘露醇。

食物中毒病人的呕吐物，粪便或剩余食物在作细菌分离鉴定的同时，接种于肉汤培养基中，孵育后取滤液注射于6~8周龄的幼猫腹腔，注射后4小时内发生呕吐、腹泻、体温升高或死亡提示有肠毒素存在的可能。这年来，采用免疫学方法检测葡萄球菌肠毒素繁多，如反向间接血凝、ELISA、放射免疫等方法较快速敏感。