细螺旋体病的实验室检查法
细螺旋体病的实验室检查法
14.2 病原体检查
(1)钩体的直接检查：①暗视野显微镜检查：钩体不易着色，而未经染色的标本钩体在光学显微镜下通常难以看清。用暗视野显微镜，可以清楚地看到钩体典型特征的形态和运动方式，通常用以检查体液或组织中的钩体，可以提供快速诊断的结果。但是，由于钩体在血液或组织中浓度过低(≤2×104条/ml)而不易检查出来，特别是对人的自然感染。另一方面由于检验者经验不足，很容易将其他成分如纤维蛋白丝误认为钩体，一般在基层不宜推广，但适用于实验感染动物的检查。②染色直接镜检：有镀银法、复红亚甲蓝染色法与吉姆萨染色法。
(2)钩体的分离培养：在钩体病早期，即发病1周内在外周血及脑脊液中，有相当多的钩体出现，因而在此期采血接种于含兔血清的科索夫(Korthof)或弗勒乔(Fletcher)半固体培养基内，可缓慢生长，一般在1周以上，阳性率达30%～50%。如已用过青霉素类药物，培养基中可加入青霉素酶。如在培养基中加入氟尿嘧啶(5-FU)，可选择性地抑制或杀灭杂菌，纯化培养，但对钩体的繁殖也可受到轻度的抑制。尿培养可在病程晚期呈阳性。
(3)动物接种：常用幼龄豚鼠或金地鼠腹腔内注射接种，一般不作常规应用。
14.3 血清学试验
发病1周后，血液中出现特异性抗体，可应用血清学试验测定。
(1)显微镜凝集试验(microscopic agglutination test，MAT)：显微镜凝集试验简称显凝试验，此试验是应用活标准菌株作抗原，与可疑患者血清混合，在显微镜下观察结果。如有特异性抗体存在，即可见到凝集现象。一次血清效价到达或超过1/400，或早、晚期两份血清比较，增加4倍者即有诊断意义。此法是目前使用最广泛的钩体血清学方法之一，既可用于诊断患者，亦可用标准抗血清作钩体菌株鉴定。
(2)酶联免疫吸附试验：国内报告采用此法检测钩体病血清特异性抗体与显凝试验相比，其灵敏性与特异性均较常用的显凝试验为高，但仍无法用于早期诊断。
(3)间接红细胞凝集试验：此法是从钩体菌体中提取一种抗原成分，将其吸附于人“O”型红细胞表面，使红细胞致敏，如遇同属抗体，则发生红细胞凝集现象，故称间接红细胞凝集试验。本试验具属特异性而无群成型的特异性，较显凝试验阳性出现早，操作简便，不需特殊设备条件，适合基层推广应用。
(4)间接红细胞溶解试验：国外常用作钩体病诊断方法。当新鲜绵羊红细胞用钩体抗原物质致敏后，在补体存在的条件下与含有抗体的血清混合时发生溶血，其灵敏性较间接红细胞凝集试验为高。
(5)间接荧光抗体法：此法是先将标准钩体菌株作成涂片，然后将可疑患者的血清滴在有菌的玻片处，经洗涤，如患者血清中具有抗体，抗原抗体结合起来，再用抗人球蛋白荧光抗体与此复合物结合，发生荧光，即为阳性，此法无型特异性。
(6)补体结合试验。
以上各种方法都是应用特异性抗原来测患者体内的特异性抗体。至于应用特异性抗体来测定体内抗原作为疾病的早期快速诊断的方法近年已有相当的进展，特别是单克隆制备技术的应用使诊断早期钩体血症中数量不多的钩体成为可能。随着分子生物学的技术发展和应用，钩体DNA探针已制备成功。并已成功建立了聚合酶链反应方法早期诊断钩体病。但这些方法要用于临床，均有待进一步改进和完善。
细螺旋体病的治疗
对钩体病各型均应特别强调“三早、一就地”，也就是早期发现、早期诊断、早期治疗、并不宜搬动患者而就地治疗。
一般治疗
强调早期卧床休息，给予易消化饮食，保持体液与电解质的平衡，如体温过高，应反复进行物理降温至38℃左右，一般在诊断未明确前不宜采用退热药物。在患者家中、门诊或入院24h内特别在6～24h内密切观察病情，警惕青霉素治疗后的雅-赫反应与肺弥漫性出血的出现。患者尿应采用石灰、含氯石灰等消毒处理。
早期及钩体血症型的治疗
(1)镇静药物
对一般钩体患者，均宜首先肌内注射苯巴比妥钠0.1～0.2g或异丙嗪、氯丙嗪25～50mg或口服地西泮5mg以控制躁动，有助于防止肺弥漫性出血等重症的发生。
(2)抗菌药物
为了消灭和抑制体内的病原体，强调早期应用有效的抗生素。如治疗过晚，脏器功能受到损害，治疗作用就会减低。青霉素应早期使用，有提前退热，缩短病期，防止和减轻黄疸和出血的功效。青霉素国外常用大剂量，国内多用首次肌内注射40万U，以后每6～8h再用同等剂量重复，直到体温下降2天后,或治疗共7天，儿童量酌减[5万U/(kg·d)]。发病急骤、中毒症状特重者，可给160万～240万U/d，分4～6次肌内注射。为了预防发生雅-赫反应，可在应用首剂青霉素肌内注射的同时或稍前用氢化可的松200～500mg，用5%葡萄糖注射液稀释后静脉滴注或以不稀释液缓慢静脉注射。青霉素过敏者，可改用庆大霉霉素，16万～24万U/d，肌内注射。也可采用四环素0.5g/次，4 次/d，口服，7天，或多西环素0.1g/次，2次/d，口服，7天。
青霉素治疗后的雅-赫反应，一般是在注射首剂青霉素0.5～4h，因大量钩体被杀灭后释放毒素所致，多数在2h内突然出现寒战、高热、头痛、身痛、脉速、呼吸快等，比原有症状更重，或体温骤降，出现低血压、休克、冷厥等。反应一般在30 min至1h即消失。少数患者可诱发肺弥漫性出血，应立即加强镇静剂如哌替啶或氯丙嗪、异丙嗪合剂，氢化可的松200～300mg缓慢静脉注射或静脉滴注，必要时还可采用物理降温，严格控制输液速度，纠正酸中毒，必要时可辅以强心。
近年来国内合成的咪唑酸酯及甲唑醇治疗本病取得满意的效果，两种药物均可口服，副作用不大。咪唑酸酯的剂量成人首次1g，以后每日4次，每次0.5g，待体温恢复正常后2～4天停药。重症患者可增至每日3g，分3次口服，待病情好转后改为每日2g，平均疗程5～7天。约8.1%的病例出现赫氏反应，较青霉素的赫氏反应轻，不需要特殊处理。本品口服后迅速被消化道吸收分布全身，并通过血脑屏障，可作预防用药，主要的副反应为消化道症状、皮疹等。
甲唑醇的剂量成人首次口服剂量1g，以后每日3～4次，每次0.5g，疗程5～7天或热退后3天停药。本品治愈率达94.31%，无赫氏反应。仅部分病人有头晕、腹痛、肠鸣、偶有皮疹、口干等反应。
(3)肾上腺皮质激素：如发病特急，体温超过40℃，或有其他严重感染中毒性表现如烦躁不安、神志淡漠、呼吸脉搏偏快、血压偏低等则可能是肺弥漫性出血的前兆。可酌情用氢化可的松200～500mg加入5%葡萄糖注射液100～200ml静脉滴注，20～30滴/min。病情紧急时可静脉缓慢直接推注，并视病情变化重复使用。
细螺旋体病的症状
病人常在感染后1-2周俄然病发，临床颠末分3个阶段：
一、早期(钩体血症期)
持续2-4日，出现发烧、头疼、全身乏力、眼结合膜充血、腓肠肌压痛、浅表淋逢迎肿大等感染中毒症状。
二、中期(钩体血症极期)
病后4-10日，表现脑膜炎症状，如剧烈头疼、频仍呕吐以及颈强等;个别病例可见大脑或脑干侵害，CSF可分理处钩端螺旋体。
3、后期(后发症期或恢复期)大多病人纯粹恢复，部分出现两品类型神经系统合并症：
①后发脑膜炎型：多为急性期后掉常反映，表现脑膜刺激征，CSF淋巴细胞增多，卵白增崇高高贵过1g/L，可检出钩端螺旋体IgM抗体，但不克不及分理处螺旋体;
②钩体脑动脉炎：急性期退烧后半月至五个月病发，是常见的神经系统紧张合并症，病理改变为高发性脑动脉炎，内膜增厚、血管闭塞导致脑梗死，表现中枢性面舌瘫、半身不遂或单瘫、运动性掉语、假性延髓麻木以及病理征，可出现全身性、部分性癫痫发作以及癫痫持续状况。个别病例主干动脉闭塞后成立侧支轮回，逐渐形成脑底异常血管网，状如烟雾病。
疾病病因类钩端螺旋体病是细螺旋体的单独种别L.interrogan导致，分3个亚型：犬型、波摩那型以及黄疸出血型。
病理SL接触受感动物社团、尿液或被污染泉水、土壤或菜蔬等可导致感染，螺旋体通过肉皮儿粘膜破损处进入境内人的身体，与动物社团有较多接触机会的测试室、宰杀场以及食物加工职员易被感染。
诊断查抄MRA或DSA显示脑动脉狭窄或闭塞，CT或MRI可见大脑半球高发性或双侧梗死灶。年青病人预后杰出，50岁以上患者常归并紧张肝病以及黄疸，病故率达50%。
关于细螺 旋体病的谣言是什么
传言被鼠尿污染的可乐罐致死网传有人嘴接触了被鼠尿污染过的可乐罐后，患细螺旋体病死亡实为谣言。浙江省疾控中心传防所陈恩富所长称，钩端螺旋体病是通过皮肤接触传播的，而不是消化道。传闻中说的老鼠尿感染可乐罐体，喝了这些可乐就感染了，这是根本不可能的，陈恩富表示钩端螺旋体通过鼠尿在清水中传播，如果是进入可乐，这种微生物根本不可能生存。
颈部淋巴结肿大症状需要做如下鉴别
1.扁桃体炎
急性扁桃体炎多具有典型临床表现，不难诊断，但应与咽白喉、文桑氏咽峡炎、白血病及猩红热等鉴别。慢性扁桃体炎目前尚无满意的客观诊断方法，主要根据反复急性发作的病史，再结合检查可见扁桃体及舌腭弓慢性充血，扁桃体小窝口有黄白色栓塞物，压挤舌腭弓有脓性物自小窝口排出，扁桃体肥大或缩小表面有瘢痕及粘连等，即可诊断。
细菌培养、小窝内脱落细胞学检查及血清抗链球菌溶血素“ O”、抗透明质酸酶及抗链激酶等的效价测定，皆可做为诊断的参考。慢性扁桃体炎应与扁桃体生理性肥大(多见于儿童及青少年，无自觉症状及反复急性发作史)、扁桃体角化症、扁桃体肿瘤等鉴别。
2.梅毒
各期梅毒都有特殊的临床症状和特点，若见下疳伴有淋巴结肿大，全身广泛对称，特别是同时在手掌、足跖有斑疹或丘疹而无痛痒症状，或生殖器部有湿润增生斑丘疹块(扁平湿疣)并伴有全身性淋巴结肿大时,应考虑到早期梅毒的可能。
若病人有不洁性交史,梅毒的可能性更大。此时应进行实验室检查，实验室检查有梅毒螺旋体检查和梅毒血清反应检查。临床常用的螺旋体检查法为暗视野映光法，梅毒螺旋体的螺旋紧密规则，折光强，运动活泼，易于辨认。发现梅毒螺旋体对一期梅毒诊断很有帮助，特别是已出现下疳而血清梅毒反应未转为阳性前更有诊断意义。
在二期梅毒的粘膜斑、湿丘疹和扁平湿疣等病损内也容易找到梅毒螺旋体。梅毒血清试验方法很多，所用抗原有非螺旋体抗原(心拟脂抗原)和梅毒螺旋体抗原两类。过去常用粗制牛心心拟脂抗原做沉淀试验(卡恩氏试验，曾译康氏试验等)和补体结合试验(瓦瑟曼氏试验等)。
目前应用的性病研究室(VDRL)玻片试验则以纯心拟脂作抗原，其成分纯净，试验结果稳定。以梅毒螺旋体作抗原的试验，国际上常用的有荧光螺旋体抗体吸收试验 (FTA-ABS)、苍白螺旋体血凝试验(TPHA)等，其特异性强，敏感度高。
梅毒血清试验对各期梅毒的诊断都很重要，早期梅毒常有强阳性反应。潜伏梅毒和无症状神经梅毒因无活动的临床症状，主要靠梅毒血清试验诊断，但应注意梅毒血清试验可以出现假阳性反应，一些非梅毒的疾病，如疟疾、系统性红斑狼疮等可出现阳性反应，称为生物学假阳性反应。
在下疳的早期，梅毒血清反应常为阴性，晚期梅毒中也可阴性，特别是在晚期神经梅毒的脊髓痨患者阴性率可达30～50%。
梅毒分期诊断标准
1、一期梅毒
⑴病史：有感染史，潜伏期一般为2～3周。
⑵临床表现：①典型硬下疳：一般单发，1～2cm大小，圆形或椭圆形，稍高出皮面，呈肉红色的糜烂面或浅在性溃疡。疮面清洁，分泌物量少，周边及基底浸润明显具软骨样硬度，无痛。多发于外生殖器，也可见于肛门、宫颈、口唇、乳房等部位。②腹股沟或患部近卫淋巴结可肿大，常为数个，大小不等，质硬，不粘连，不破溃，无痛。
⑶实验室检查：①暗视野显微镜检查：皮肤粘膜损害或淋巴结穿刺液可查见梅毒螺旋体。②梅毒血清学试验：梅毒血清学试验阳性。如感染不足2～3周，非梅毒螺旋体抗原试验，可为阴性。应于感染4周后复查。
疑似病例：具备⑴及⑵为疑似病例。
确诊病例：疑似病例加⑶任何一项为确诊病例。
2、二期梅毒
⑴病史：有感染史，可有一期梅毒史，病期2年以内。
⑵临床表现：①皮疹为多形态，包括斑疹、斑丘疹、丘疹、鳞屑性皮疹及脓疱疹等，常泛发对称;掌跖易见暗红斑及脱屑性斑丘疹;外阴及肛周皮疹多为湿丘疹及扁平湿疣等，不痛可有瘙痒。头部可出现虫蛀样脱发。二期复发梅毒，皮损局限，数目较少，尚可见环形皮疹。②口腔可发生粘膜斑，尚可出现眼损害、骨损害、内脏及神经系统损害等。③全身可出现轻微不适及浅表淋巴结肿大。
⑶实验室检查：①暗视野显微镜检查：二期皮疹尤其扁平湿疣、湿丘疹及粘膜斑，易查见梅毒螺旋体。②梅毒血清学试验(非梅毒螺旋体抗原试验及梅毒螺旋体抗原试验)为强阳性。
疑似病例：具备⑴及⑵为疑似病例。
确诊病例：疑似病例加⑶任何一项为确诊病例。
3、三期梅毒(晚期梅毒)
⑴病史：有感染史，可有一期或二期梅毒史。病期2年以上。
⑵临床表现：常见结节性皮疹、近关节结节及皮肤、粘膜、骨骼树胶肿等。心脏血管系统受累以单纯性主动脉炎、主动脉瓣闭锁不全和主动脉瘤多见。神经系统受累以梅毒性脑膜炎、脊髓痨和麻痹性痴呆多见。
⑶实验室检查：①梅毒血清学试验：非梅毒螺旋体抗原试验大多阳性，亦可阴性，梅毒螺旋体抗原试验为阳性。②组织病理检查：有三期梅毒的组织病理变化。③脑脊液检查：神经梅毒：淋巴细胞≥10×106/l，蛋白量>50mg/dl，vdrl试验阳性。
疑似病例：具备⑴及⑵为疑似病例。
确诊病例：疑似病例加⑶任何一项为确诊病例。
4、潜伏梅毒(隐性梅毒)
⑴有感染史，可有一期、二期、或三期梅毒史。
⑵无任何梅毒性的临床症状和体征。
⑶非梅毒螺旋体抗原试验2次以上阳性或梅毒螺旋体抗原试验阳性(需排除生物学假阳性)。脑脊液检查阴性。
⑷病期2年内为早期潜伏梅毒，2年以上为晚期潜伏梅毒。
5、先天梅毒(胎传梅毒)
⑴生母为梅毒患者。
⑵临床表现：①早期先天梅毒(2岁以内)：相似获得性二期梅毒，但皮损常有红斑、丘疹、糜烂、水疱、大疱、皲裂和骨软骨炎、骨炎及骨膜炎等，可有梅毒性鼻炎及喉炎、淋巴结肿大、肝脾肿大、贫血等。②晚期先天梅毒(2岁以上)：相似获得性三期梅毒，但以间质性角膜炎、赫秦生齿、马鞍鼻、神经性耳聋等为较常见的特征，还可出现皮肤、粘膜树胶肿及骨膜炎等。③先天潜伏梅毒：除感染源于母体外，余同获得性潜伏梅毒。
⑶实验室检查：①早期先天梅毒皮肤及粘膜损害中可查到梅毒螺旋体。②梅毒血清学试验阳性。
6、妊娠梅毒
孕期发生或发现的活动性梅毒或潜伏梅毒称为妊娠梅毒。
梅毒需要做哪些检查
1、暗视野显微镜检查 暗视野检查简便、快捷而准确。一处皮损只有连续3次检查后仍未发现梅毒螺旋体才能判为阴性。
2、梅毒螺旋体抗原血清试验(类脂质血清反应)：用正常牛心肌的心磷脂(cardiolipin)为抗原，与梅毒患者血清中抗心磷脂抗体(即反应素)结合，结合后发现凝集，生成絮状物为阳性反应。用于梅毒诊断、疗效观察和对复发或再感染的监测。方法有：
性病实验室试验(Venereal Disease Research Laboratory test，又称VDRL试验)：该试验是1946年美国性病研究实验室创建的，故以该实验室命名。试验在玻片上进行，可以定性或半定量，低倍显微镜观察结果。
快速血浆反应素(rapid plasma reagin，RPR)试验：为VDRL试验的改良法，可使用血浆。原理是用未经处理的活性炭颗粒(直径3～5μm)吸附VDRL抗原。此颗粒若与待检血清中的反应素结合，便形成黑色凝集块，肉眼即可识别，不需低倍镜观察。试验在专用纸卡的反应圈(内径18 mm)内进行。此试验敏感性高，具一定特异性，而且经济、方便、快速，适合大规模筛选且能定性或半定量。
结缔组织病实验室检查
本病几乎所有病人都有高滴度的(常>1:1000) 荧光 抗核抗体,呈斑点型.用血 细胞凝集试验可检测 到可提取核抗原(ENA)的抗体滴度很高(>1:100000),因为ENA的组分是一种对核糖核酸酶(RNase) 敏感的细胞核糖核蛋白,故以RNase消化后即可消除ENA和血细胞凝集反应,免疫扩散法可以肯 定 抗RNP抗体的存在,而抗ENA的耐核糖核酸酶的Sm组分抗体一般不存在.通常抗RNP抗体持续 多年,但在长期缓解的病人,该抗体水平可显著下降或转阴. 本病不常见 抗DNA抗体及狼疮细胞.类风湿凝集素常为阳性,滴度常增高,血沉常增快,75%病人 有弥漫的高丙球蛋白血症,达2~5g/dl.只有约25%病人血清补体有轻度到中度减少.有活动性肌 炎时血清肌酸激酶和醛缩酶通常增高. 本病30%~40%病人有中度贫血与白细胞减少.有临床意义的Coombs试验阳性的 溶血性贫血与 血小板减少不常见.有肾小球肾炎时尿常规可查到 血尿,管型和蛋白.